Examen Microscopique en Biologie Médicale


◉ Introduction


◉ Mise au Point au Microscope Optique

La mise au point au microscope consiste à ajuster la distance entre l'objectif du microscope et l'échantillon pour obtenir l'image la plus nette de ce que vous observez. Voici les étapes générales pour effectuer la mise au point :


◉ Examen direct à l'état frais

C'est une technique rapide, facile et peu coûteuse qui permet de visualiser l'échantillon sous microscope sans aucune préparation (ni fixation ni coloration).

L'état frais permet de visualiser les différents composants de l'échantillon, mais sa plus grande valeur réside dans sa capacité à conserver les bactéries et les parasites vivants, ce qui permet une observation optimale de leur nombre, de leurs mouvements et de leur agencement.

Elle peut être réalisée directement à partir du produit pathologique (urine, liquide céphalorachidien, etc.) ou à partir d'une suspension bactérienne. Différents supports peuvent être utilisés, tels que les lames et lamelles, les cellules de Malassez et les cellules de Nageotte.

L'observation se fait généralement à l'objectif ×40 avec un diaphragme quasiment fermé pour augmenter le contraste. Il est conseillé d'attendre quelques instants jusqu'à ce que les mouvements liquidiens cessent.

1- L'état frais entre lame et lamelle

L'état frais est une pratique courante, facile, rapide et largement utilisée en laboratoire de bactériologie. Voici les principales étapes :

L'état frais entre lame et lamelle
L'état frais entre lame et lamelle
L'état frais entre lame et lamelle

Selon le type d'échantillon et l'objectif du prélèvement, l'examen à l'état frais permet de détecter la présence ou l'absence de plusieurs composants biologiques tels que :

Exemples

2- Cellules Hématimètres

La numération de différents éléments des liquides biologiques est possible en dehors de tout automate grâce à l'utilisation de cellules de verre calibrées appelées hématimètres.

Il s'agit de lames de verre épaisses creusées de rigoles, présentant un quadrillage particulier sur la plate-forme centrale légèrement abaissée. Recouvertes d'une lamelle posée sur les plateformes latérales élevées, elles permettent, avec un volume très précis et connu, de dénombrer les cellules des liquides biologiques.

Il existe plusieurs types d'hémocytomètres, tous dotés de grilles de comptage différentes, parmi les plus utilisés figurent la cellule de Malassez, la cellule de Thoma, la cellule de Nageotte et la cellule Neubauer.

Pour obtenir une numération proche de la réalité, il est important de :

2. 1 Manipulation

Note:

2. 2 Comptage



◉ Examen microscopique après coloration

La coloration des produits biologiques est une technique très courante en biologie médicale. Elle permet d'apporter plus de détails voire de rendre visibles des éléments qui sont invisibles à l'état frais.

Il existe plusieurs types de colorations, avec différentes procédures de réalisation. Le choix dépend du type de prélèvement et de l'élément recherché. Grossièrement, elles peuvent être classées en colorations simples (non-différentielles) et colorations différentielles

La première étape commune est généralement la réalisation de frottis et de fixation. Ensuite, après coloration, la lecture se fait à un grossissement de X100 avec un diaphragme ouvert.

1- Coloration simple

Les colorations simples, ou coloration directe, sont des procédures rapides à réaliser qui consistent à ajouter un seul colorant au frottis, laisser agir, puis laver, sécher et observer au microscope. Elles permettent de déterminer la présence et la morphologie des éléments biologiques tels que les bactéries, les cellules, etc.

La coloration simple utilise des colorants basiques tels que le bleu de méthylène, la safranine, le violet cristal, le vert malachite, etc.


2- Coloration différentielles

La coloration différentielle consiste à utiliser plusieurs colorants pour différencier divers types de cellules, de structures et de micro-organismes.

Il existe un certain nombre de méthodes de coloration différentielle, telles que la coloration de Gram, considérée comme la référence en bactériologie, qui permet de différencier les bactéries en Gram positif et Gram négatif. La coloration de Ziehl-Neelsen permet de détecter et de différencier les bacilles tuberculeux des autres bactéries.

◉ Conclusion

En conclusion, l'examen microscopique s'avère être une technique indispensable en laboratoire d'analyse médicale. Il permet une observation détaillée des échantillons biologiques, fournissant ainsi des informations précieuses pour le diagnostic et la prise en charge des patients.

Il est essentiel de souligner l'importance de la rigueur et de la précision dans la réalisation de cet examen, ainsi que la nécessité de prendre en compte les diverses sources d'erreurs potentielles.


Références

  1. Holmskov, A. (2023, December 14). How to count cells with a hemocytometer - ChemoMetec. ChemoMetec. https://chemometec.com/how-to-count-cells-with-a-hemocytometer/
  2. Difference between Simple and Differential Staining. BYJUS. https://byjus.com/biology/difference-between-simple-and-differential-staining/
  3. Le microscope. (n.d.). http://urine.optmq.connexence.com/docfr/doc_009.html
  4. CSCQ Mars 2020 Evelyne Mertz, Dagmar Kesseler - FICHE TECHNIQUE - Microscope
  5. HERVÉ SAUER JOËLLE SURREL - Principes et utilisations de base du microscope